BESCHREIBUNG
AccuTherm™ ist ein hitzestabiles Enzym, das eine 5'-3'-DNA-Polymerase- und eine 3'-5'-proof-reading-Exonuklease-Aktivität besitzt. Diese Polymerase ist aus dem hyperthermophilen, marinen archaebakterium Pyrococcus furiosis (Pfu) isoliert worden. AccuTherm™ zeigt eine extrem hohe Genauigkeit. Man muß jedoch sagen, dass AccuTherm™ aufgrund seiner sehr hohen Exonuklease-Aktivität lange DNA-Fragmente nicht so effizient amplifiziert wie BioTherm oder KlenTherm. Die Mischung von entweder BioTherm oder Klentherm mit AccuTherm™ zeigtjedoch wieder eine sehr stabile Synthese auch längerer DNA-Fragmente (Barnes, 1994; Proc.Natl.Acad.Sci. USA 91:2216-2220).
CONCENTRATION
5 units/µl
UNIT DEFINITION
One unit is defined as the amount of enzyme that incorporates 10 nmoles of dNTPs into acid-insoluble form in 30 minutes at 72°C under the assay conditions (25 mM TAPS (tris-(hydroxymethyl)methyl-amino-propane-sulphonic acid, sodium salt) pH 9.3 (at 25°C), 50 mM KCI, 2 mM MgCl2, 1 mM .-mercaptoethanol) and activated calf thymus DNA as substrate.
STORAGE BUFFER
10 mM K-phosphate buffer pH 7.0, 100 mM NaCI, 0.5 mM EDTA; 1 mM DTT, 0.01% Tween 20; 50% glycerol (v/v)
STORAGE TEMPERATURE
Store AccuTherm™ polymerase below 0°C, preferably at -20°C, in a constant temperature freezer
COMPANION PRODUCTS
Synergy™ DNA polymerase, SynergyN™ DNA polymerase
5X REACTION BUFFER
83 mM (NH 4) 2 S0 4 , 350 mM Tris-HCI pH 8.8 (at 25°C), 22 mM MgCl2 , 0,75% Triton X100, 100 mM KCl
