Tth DNA Ligase

BESCHREIBUNG

Thermus thermophilus DNA Ligase (rekombinante Form des Enzyms; kloniert aus dem Stamm HB27)
katalysiert die Bildung von Phosphodiester-Bindungen zwischen dem 5´-Phosphat-Ende und der 3´-Hydroxil-
Gruppe benachbarter Nukleotide, welche mit einem komplementären Strang der Ziel-DNA hybridisieren.
Die Ligation kann jedoch nur erfolgreich sein, wenn die Oligonukleotide vollkommen an den komplementären
DNA-Strang gebunden sind und keine Lücken zwischen den Nukleotiden bestehen. Auf diese Weise
kann der Austausch einzelner Basen ermittelt werden.

APPLICATION

• LCR DNA
• ligation

CONCENTRATION

40 units/µl

UNIT DEFINITION

One unit is defined as the amount of the enzyme required to give 50% (cohesive end unit) ligation of the 12- base pair cohesive ends of 1 µg of BstE II-digested ë-DNA in 15 minutes at 45°C in a total reaction volume of 50 µl. One cohesive end ligation unit equals 0,015 Weiss units.

STORAGE BUFFER

10 mM Tris-HCl pH 7.5; 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 0.2% Triton X-100; 50% glycerol

STORAGE TEMPERATURE

-20°C

10X REACTION BUFER

200 mM Tris-HCl pH 7.6; 250 mM KCl; 100 mM MgCl₂, 100 mM DTT; 10 mM NAD, 1% Triton X-100
Optimal ligation occurs at 45°C.

QUALITY CONTROL

Activity, SDS-PAGE purity, absence of RNases, ssDNases, endonucleases and phosphatases.